利用計算機進行圖象處理,從而得到細胞或組織內部微細結構的熒光圖象,以及在亞細胞水平上觀察諸如Ca2+、pH值、膜電位等生理信號及細胞形態的變化。
下面讓我們來了解一下激光共聚焦顯微鏡的組成結構吧
激光共聚焦掃描顯微鏡(Confocal laser scanning microscope,CLSM)用激光作掃描光源,逐點、逐行、逐面快速掃描成像,掃描的激光與熒光收集共用一個物鏡,物鏡的焦點即掃描激光的聚焦點,也是瞬時成像的物點。
系統經一次調焦,掃描限制在樣品的一個平面內。調焦深度不一樣時,就可以獲得樣品不同深度層次的圖像,這些圖像信息都儲于計算機內,通過計算機分析和模擬,就能顯示細胞樣品的立體結構。
在結構 配置上,激光掃描共聚焦顯微鏡除了包括普通光學顯微鏡的基本構造外,還包括激光光源、掃描裝置、檢測器、計算機系統 (包括數據采集、處理、轉換、應用軟件)、圖像輸出設備、光學裝置和共聚焦系統等部分。
由于該儀器具有高分辨率、高靈敏度、"光學切片"(Optical sectioning)、三維重建、動態分析等優點,因而為基礎醫學與臨床醫學的研究提供了有效手段。此外,CLSM 對熒光樣品的觀察具有明顯的優勢,只要能用熒光探針進行標記的樣品就可用其觀察。
激光共聚焦掃描顯微鏡既可以用于觀察細胞形態,也可以用于細胞內生化成分的定量分析、光密度統計以及細胞形態的測量, 配合焦點穩定系統可以實現長時間活細胞動態觀察。